1、 标记的原理是化学性质的还是物理性质的?
答:标记的原理是化学性质的,也就是说染料是通过共价化学键的方式与抗体之间进行结合。化学共价键的结合方式能够确保在多重染色的情况下,多种被不同CF染料标记试剂盒标记的抗体之间不会发生染料重分布和迁移。
2、 如果没有纯化步骤,我怎么能确保在使用过程中,那些未被连接到抗体上的多余的染料不会对下?#38382;?#39564;造成影响?
答:这个问题涉及到我们产品创新,染料独一无二的制备,加上缓冲体系以及标记的原理过程可非常完美的解决这个问题。使用Mix-n-Stain标记试剂盒,您绝不用担心这个问题。至于详细的机理过程正是我们独创的专利保护技术,恕不能公布。
3、 蛋白与染料的标记的最佳配比是多少?
答:在试剂盒推荐的样品量范围内,无需计算染料的用量和反应时间,只需直接把样品加入标记。只需要把你的抗体样品与CF染料在提供的小管里加上反应缓冲液进行混合标记,就可以得到非常理想的标记效果。传统的标记试剂?#24615;?#20351;用时就必须要计算好染料与蛋白抗体的反应配比,以确保不会过染或染色不充分。过染会导致荧光淬灭,丢失抗体的特异性结合位点等,以致会使能检测到的荧光信号大大减弱。这些问题在Mix-n-Stain标记试剂盒标记过程中,都不用担心,因为在染料的特性和反应缓冲体系已完美的解决了这些问题。
4、 能够使用Mix-n-Stain试剂盒标记除抗体以外的蛋白质吗?
答:Mix-n-Stain主要是针对抗体而设计的,不推荐使用Mix-n-Stain标记其他非抗体的蛋白。
5、 如何确定加入抗体的浓度?
答:Mix-n-Stain试剂盒推荐的抗体浓度是0.5~1.0mg/ml。如果你的抗体初始浓度太低,你可以低速离心的方法进行离心处理或者冻干法处理进行浓缩。如果你的抗体浓度高于这个范围的话,你可以使用1X的PBS稀释。推荐浓度以外的抗体初始浓度将可能导致过染或者染色不饱和,会直接影响结果。
6、染色的整个过程需要花费多长时间?
答:加样时间大约是30秒,也就是取决于你的操作。之后放置30?#31181;?#30340;时间进行染色反应,整个过程就完成?#24661;?#20320;可以马上使用前面已经标记好的抗体进行下一步试验,比如显微观察,流式细胞术和WB分析等。如果要把标记好的抗体进行长期保存,我们推荐使用试剂盒自带的保存液进行保存,适当的保存条件至少可以保存6个月。
7、试剂盒反应缓冲体系可以兼容哪些抗体缓冲体系?
答:试剂盒反应缓冲体系可以兼容的缓冲体系有PBS、HEPES、MES、MOPS以及硼酸?#20301;?#20914;体系。缓冲体系中的含有20mM的Tris 也是可以兼容的,但当Tris浓度高于20mM的时候推荐使用前面提到的冻干法或者离心法进行清洁处理。
8、标记反应液兼容腹水,血清或者肿瘤细胞培养液吗?
答:不能,强烈要求在标记反应前,使用清洁步骤去除这些不必要的介质。
9、 标记好的抗体稳定性怎么样?
答:如果使用Mix-n-Stain提供的保存?#28023;?#20110;4℃或者更低的温度下可以至少保存3个月。如果要更长时间的保存,推荐温度为-20℃。跟其他的标记试剂盒比如Invitrogen的Zenon相比,CF-抗体偶合物是通过化学键的方式结合,而非物理方式结合,因?#21496;?#26377;高度的稳定性。